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去细胞同种异体神经支架的制备及种植雪旺细胞的体外实验

来源:骨科在线 编号 : #22450#
2011-12-23
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赵劲民, 兰学文
广西医科大学第一附属医院创伤骨科手外科

目的 通过化学萃取法制备同种异体神经支架,并将培养的雪旺细胞与支架进行体外结合培养。探讨如何构建具有仿生结构,抗原性小且能含有多种促神经再生成分的支架,修复较长距离的神经缺损。
方法 取Wistar大鼠双侧坐骨神经,运用3%三硝基甲苯和4%脱氧胆酸钠分别萃取1,2和3次,在新鲜神经和萃取神经中段取材,行HE染色,S-100及层粘连蛋白(Laminin)免疫组化染色及透射电镜检测。取SD胎鼠坐骨神经及臂从神经,使用复合酶消化,差速贴壁及Arab-c抑制成纤维细胞生长的培养方法获得大量高纯度的雪旺细胞。再将雪旺细胞注入同种异体神经支架内,并行扫描电镜观察。
结果 用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取后,坐骨神经内细胞和髓鞘被清除,神经基底膜得以保留。电镜下可见萃取后的神经由空的神经基底膜管和管之间的胶原纤维构成。萃取次数增加后,神经内残留的S-100蛋白显著减少,但反复萃取后支架结构受破坏。去细胞同种异体神经支架适合雪旺细胞体外生长,雪旺细胞在其内有迁移排成行的特性。
结论 用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取2次可去除细胞而保留神经基底膜管,是制备具有仿生结构神经支架的理想方法。神经支架种植雪旺细胞后可能成为一种理想的神经缺损修复材料。
 

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