关节

涂意辉   薛华明  夏志道  蔡珉巍   刘晓东   马童   张长青

目的 糖皮质激素会破坏软骨，通过观察地塞米松对人骨关节炎软骨细胞（human articular chondrocytes，HACs）凋亡及Fas/FasL 基因表达的影响，探讨其促进HACs 凋亡的作用机制。 方法 取行人工膝关节置换的膝骨关节炎患者自愿捐赠软骨组织，体外分离培养HACs，取第2 代细胞进行实验。将HACs 分别置于含浓度为0.125、1.25、12.5、25 及50 μg/mL 地塞米松培养液中，培养48 h 后采用MTT 法选择地塞米松最佳工作浓度进行后续实验。将HACs 分别采用最佳工作浓度地塞米松（实验组）及不含地塞米松培养液（对照组）培养，0、24、48 h 后行TMRE/
Hoechst/Annexin V-FITC/7-AAD 四重染色检测细胞凋亡，48 h 后行实时定量PCR 检测Fas/FasL mRNA 表达，0、24、48 h后行免疫组织化学染色检测Fas/FasL 蛋白表达。 结果 25 μg/mL 浓度组细胞抑制率显著高于50 μg/mL 浓度组，差异有统计学意义（P < 0.05）；与其他浓度组比较，差异亦有统计学意义（P < 0.05）；选择25 μg/mL 浓度作为后续实验工作浓度。培养0、24、48 h，实验组HACs 凋亡细胞百分比分别为5.8% ± 0.3%、27.0% ± 2.6%、36.0% ± 3.1%，呈明显时间依赖性（P < 0.05）。培养48 h 后实验组及对照组Fas mRNA 相对表达量分为（8.93 ± 1.12）× 10—3 及（3.31 ± 0.37）× 10—3，FasLmRNA 相对表达量分别为（5.92 ± 0.66）× 10—3 及（2.31 ± 0.35）× 10—3，两组比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。随培养时间延长，实验组Fas 及FasL 蛋白表达逐渐增加，且各时间点均显著高于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 地塞米松可促进HACs 细胞凋亡及上调凋亡基因Fas/FasL 表达，为进一步探讨Fas/FasL 信号通路在地塞米松促HACs 凋亡中的作用提供了实验依据。