关节

黄维一  刘幸卉  陈荣  冯利强   廖华   余磊  曾慧君

目的 探讨不同频率的周期性应力加载对体外培养多层肌管极性与分化的影响，筛选优化的肌组织体外应力加载培养条件。 方法 体外培养C2C12 成肌细胞于Sylgard 184 铸型凹槽诱导分化形成多层肌管组织，采用自制体外细胞拉伸 仪，对培养并分化的肌管进行间歇性应力加载：加载幅度10%，加载频率分别为0（A 组）、0.25（B 组）、0.50（C 组）、1.00 Hz（D 组），加载时间3 次/d，每次1 h。连续加载5、7、10 d 时，观察各组肌管形态； RT-PCR 和实时荧光定量PCR（real-time fl uorescent quantitative PCR，QRT-PCR）分析检测成肌相关基因成肌分化抗原（myogenic differentiation antigen，MyoD）、肌细胞生成素（Myogenin）、结蛋白（Desmin）、肌球重链蛋白（myosin heavy chain，MyHC） mRNA 的表达
差异。 结果 倒置相差显微镜观察示，应力加载促进各组肌管的极性融合及数量增加，其中B 组加载培养7 d 时，多层
肌管排列紧密，极性显著。加载条件能促进成肌相关基因mRNA 的表达：组内随加载时间延长，各组MyoD 的mRNA 表
达逐渐下降，7、10 d 与5 d 比较差异均有统计学意义（P < 0.05）；Myogenin、Desmin、MyHC 的mRNA 表达呈先升高后降低趋势，以7 d 表达量最高；B 组除7 d 与10 d Desmin 的mRNA 表达比较差异无统计学意义（P > 0.05）外，其余各时间点比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。同时间点随加载频率增加，MyoD、Myogenin、Desmin、MyHC 的mRNA 表达呈先升高后降低趋势，以B 组表达量最高；除5 d B、C 组Desmin 和10 d A、B 组MyHC 的mRNA 表达比较差异无统计学意
义（P > 0.05） 外，其余各组与B组各相关基因mRNA表达比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 低频（0.25 Hz）、适时（7 d）的周期性应力加载有利于生长于Sylgard 184 弹性材料表面的多层肌管极性分化，但随着应力加载时间延长，肌管的老化加速。