脊柱

李力群     高建华    潘盛盛    倪彬婷

目的 探讨一种人高活性血管基质层细胞（stromal vascular fraction cells，SVFs）快速分离及荧光标记的有效方法，为SVFs 用于临床奠定理论基础。 方法 取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织，分别用0.065%、0.125%、0.185% 3 种浓度的Ⅰ型胶原酶消化，提取SVFs。收集细胞悬液进行细胞计数，锥虫蓝染色计算细胞成活率。用1’ 双十八烷-3， 3， 3’，3’- 四甲基吲哚羧化青- 高氯酸盐（1，1’-dioctadecyl-3，3，3’，3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate，DiI）荧光标记0.125% 浓度组SVFs，倒置荧光显微镜下观察标记情况；将DiI 标记的SVFs 接种培养，倒置显微镜观察细胞形态学变化，MTT 法检测DiI 标记前后细胞增殖能力。 结果 0.065%、0.125% 及0.185% 浓度组SVFs 细胞总数分别为（138.68 ± 11.64）× 104、（183.80 ± 10.16）× 104、（293.07 ± 8.31）× 104 个，组间比较差异均有统计学意义（P < 0.01）；
细胞成活率分别为91% ± 2%、90% ± 2%、81% ± 2%，0.065%浓度组和0.125%浓度组均显著高于0.185%浓度组（P < 0.01），0.065% 浓度组和0.125% 浓度组比较差异无统计学意义（P=0.881）。倒置荧光显微镜观察示，0.125% 浓度组细胞均可被DiI 荧光标记，标记后的细胞膜完整，细胞质丰富，细胞形态正常，细胞核未染荧光；DiI 标记的SVFs 细胞悬液接种培养后，细胞能顺利贴壁及传代。MTT 法检测示DiI 标记前后SVFs 细胞生长曲线相似，生长趋势吻合。 结论 0.125% 浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织，获取大量SVFs，同时对细胞损伤较小，是理想的工作浓度；DiI 可有效标记SVFs。