脊柱

张 涛    钱济先    姬振伟    马云雷    贠 喆    蔡承魁    裘秀春    马保安

目的 髓核细胞衰老凋亡是椎间盘退行性变的病理基础，探讨髓核细胞表型分子及延缓髓核细胞衰老退变的机制。 方法 原代培养8 ～ 10 周龄雄性SD 大鼠髓核细胞，免疫细胞化学染色鉴定髓核细胞表型分子低氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）、HIF-1β、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP-2）及Ⅱ型胶原表达。小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）瞬时转染髓核细胞沉默p53、p21 后行RT-PCR 及Western blot检测沉默效率，siRNA 转染前后细胞衰老相关β 半乳糖苷酶（senescence associated-β-galactosidase，SA-β-gal）染色检测髓核细胞衰老变化，流式细胞仪检测髓核细胞周期变化，MTT 法生长曲线分析髓核细胞增殖变化。 结果 免疫细胞化学染色显示髓核细胞表达HIF-1α、HIF-1β、MMP-2 及Ⅱ型胶原。第35 代髓核细胞转染p53、p21 siRNA 后RT-PCR 及Western blot 检测示p53、p21 表达明显受到抑制。第35 代髓核细胞SA-β-gal 染色阳性率明显高于第1 代髓核细胞（P < 0.001）；正常第35 代髓核细胞经p53 siRNA（p53 转染组）和p21 siRNA（p21 转染组）转染后，SA-β-gal 阳性率明显低于正常第35 代髓核细胞（正常组）和加入脂质体LipofectaminTM 2000 而无siRNA 的第35 代髓核细胞（阴性对照组），差异有统计学意义（P < 0.001）。细胞周期分析显示，p53 转染组及p21 转染组G1 期百分比均明显低于正常组和阴性对照组（P < 0.05），S 期百分比明显高于正常组和阴性对照组（P < 0.05）。MTT 生长曲线显示转染p53、p21 siRNA 后可促进髓核细胞增殖。 结论 沉默p53、p21 基因可通过调节细胞周期而抑制髓核细胞衰老退变，改善椎间盘退变过程；沉默p53、p21基因可能是潜在的治疗椎间盘退行性变的方法。