期刊正文

王永成　　孟昊业　　袁雪凌　　彭江　　郭全义　　卢世璧　　汪爱媛

　　目的：通过体外模拟压应力刺激兔软骨细胞复合脱细胞软骨细胞外基质（extracellular matrix，ECM）源性三维多孔支架培养组织工程软骨，探讨生物反应器中三维动态培养对软骨生长的促进效应。

　　方法：取健康成年新西兰大白兔四肢关节软骨分离培养软骨细胞，将第2代细胞复合于脱细胞软骨ECM源性三维多孔支架，静态预培养5 d后随机分为2组，A组继续静态培养，B组于生物反应器中进行动态压应力加载（频率1 Hz，15%压缩应变）培养。3 周后采用活-死细胞染色试剂盒检测细胞活性，扫描电镜观察细胞在支架上的生长及分布，定量检测支架中细胞的糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）、胶原蛋白及DNA含量，进行力学分析检测弹性模量。

　　结果：激光共聚焦显微镜观察示，B组支架内细胞生长良好且分布均匀；A组细胞生长较差，中心区域失染。扫描电镜观察示，B组软骨细胞在支架上黏附、增殖、生长良好；A组软骨细胞明显减少，且分布散乱。生化成分分析示，B组胶原蛋白、GAG及DNA含量分别为（675.85 ± 27.93）?g/mg、（621.72 ± 26.75）?g/mg、（16.98 ± 3.23）?g/样本，A组分别为（438.72 ± 6.35）?g/mg、（301.63 ± 30.51）?g/mg、（10.18 ± 4.39）?g/样本，B组各成分含量均明显高于A组（t=18.512，P=0.000；t=17.640，P=0.000；t=2.790，P=0.024）。力学性能测试示，B组弹性模量（0.67 ± 0.09） MPa显著高于A组（0.49 ± 0.16） MPa和空白支架（0.43 ± 0.12） MPa，差异有统计学意义（P < 0.05）。

　　结论：生物反应器模拟压应力三维动态培养优于普通静态三维培养，可提供有利于软骨细胞在ECM支架中生长的最佳环境，是体外构建组织工程软骨的良好方法。