期刊正文

郝增涛   冯卫   郝廷    余斌

目的 探讨大鼠BMSCs 来源的成骨细胞和内皮细胞复合壳聚糖- 羟基磷灰石多孔支架植入大鼠桡骨缺损处的成骨作用和成血管作用。 方法 取分离培养至第3 代的SD 大鼠BMSCs 行成骨和成内皮细胞诱导并鉴定。分别将内皮细胞（A 组）、成骨细胞（B 组）、混合细胞（成骨细胞和内皮细胞比例为1 ∶ 1，C 组）均匀滴加于壳聚糖- 羟基磷灰石多孔支架上制备3 组细胞- 支架复合物，MTT 检测支架内细胞增殖活性。取2 月龄雄性SD 大鼠30 只，制作大鼠桡骨5 mm 长缺损模型并分别植入3 组细胞- 支架复合物（n=10）。术后4、8、12 周分别取移植物行HE 染色观察，CD34免疫组织化学染色计数微血管密度，RT-PCR 法检测骨桥蛋白（osteopontin，OPN）和骨保护素（osteoprotegrin，OPG）mRNA 表达。 结果 BMSCs 成骨诱导7 d 后ALP 染色可见细胞质内蓝染颗粒，细胞核呈红染；内皮细胞诱导14 d 后，CD34 免疫细胞化学染色可见细胞内棕色颗粒。MTT 检测示3 组细胞活性随时间延长逐渐升高。HE 染色示，术后12 周A 组未见明显类骨质形成，而有较密集的微血管结构及较多纤维组织形成；B、C 组可见均质的类骨质，呈条索状和岛状分布，可见大量成骨样细胞存在。术后各时间点A、C 组微血管密度均显著高于B 组（P < 0.05）；A 组术后12 周微血管密度高于C 组（P < 0.05），其余2 个时间点A、C 组间差异无统计学意义（P > 0.05）。A 组3 个时间点OPN 和OPG mRNA 表达水平均较低，与B、C 组比较差异有统计学意义（P < 0.05）；B、C 组分别于术后8、12 周OPN mRNA 表达达峰值，4 周时OPG mRNA 表达达峰值。 结论 BMSCs 来源的成骨细胞和内皮细胞按1 ∶ 1 比例共培养于壳聚糖- 羟基磷灰石多孔支架作为组织工程骨移植物，可以促进大鼠桡骨缺损部位骨的形成和血管化，促进骨缺损愈合。