多效生长因子基因转染小鼠脂肪来源干细胞的实验研究

陈昌金袁惠辜海英杨雪梅赵梓亦
摘要:目的探讨多效生长因子基因（pleiotrophin，Ptn）转染小鼠脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）作为组织工程血管的重建种子细胞的可行性，并检测其基因表达，为缺血性病损治疗提供新手段。方法取3只清洁级近交系C57BL/6W雌性小鼠（体重15～20 g）腹股沟皮下脂肪，采用酶消化法体外分离、培养ADSCs，流式细胞仪行细胞表面标志物CD29、CD44鉴定。实验分为转染pIRES2-LEGFPN1组（含Ptn基因编码序列，A组）和转染pLEGFP-N1负对照组（含GFP基因编码序列，B组）。ADSCs转染后，A组以最佳筛选浓度200 μg/mL 的G418对转染后细胞进行筛选，流式细胞仪鉴定转染后细胞免疫表型。实时荧光定量PCR、Western blot检测A、B组细胞Ptn基因和PTN蛋白表达。结果实验成功分离、培养小鼠ADSCs；细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.5%、95.8%，双阳性率达93.6%。A组转染Ptn后细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.1%、95.6%，双阳性率达93.4%。实时荧光定量PCR、Western blot检测示，A组Ptn基因和PTN蛋白相对表达水平均显著高于B组（P < 0.05）。结论Ptn基因能转染小鼠ADSCs并高表达PTN蛋白，为组织工程血管构建种子细胞选择提供了新思路。

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