17β-雌二醇通过整联蛋白α1β1、α2β1抗大鼠髓核细胞凋亡的实验研究

杨思东     丁文元    宋艳丽    谷体心    杨大龙     孙亚澎     马雷    路宽    郭旭朝

【摘要】目的探索胞膜整联蛋白α1β1、α2β1参与的17β雌二醇抗大鼠腰椎间盘髓核细胞凋亡的作用机制。方法原代培养大鼠髓核细胞，细胞传代至第3代，用不含胎牛血清和酚红的培养液培养，按以下分组实验：对照组，加入少量乙醇作为对照；雌激素组，加入17β-雌二醇干预；雌激素＋抑制剂组，加入17β1雌二醇和雌激素受体抑制剂ICI182780干预。细胞培养48h后，行流式细胞术以及TUNEL法检测细胞凋亡；细胞一胶原黏附实验检测细胞与I、Ⅱ型胶原的粘附水平；western印迹法对整联蛋白亚基α1β1、β1定量检测。结果免疫细胞化学检测到髓核细胞Ⅱ型胶原呈阳性，髓核细胞纯度较高。各组细胞凋亡率的差异有统计学意义（F=24．20，P〈0．001）。雌激素组凋亡率低于对照组和雌激素＋抑制剂组，对照组与雌激素＋抑制剂组差异无统计学意义。各组细胞对I型胶原的黏附水平差异无统计学意义，对Ⅱ型胶原的黏附水平差异有统计学意义（F=10．68，P〈0．05），雌激素组高于对照组和雌激素＋抑制剂组，对照组与雌激素＋抑制剂组差异无统计学意义。整联蛋白α1亚基表达水平差异无统计学意义。α2和β1亚基表达水平差异均有统计学意义，雌激素组高于对照组和雌激素＋抑制剂组，对照组与雌激素＋抑制剂组差异无统计学意义。结论17β1-雌二醇抗大鼠髓核细胞凋亡，其作用机制为上调了整联蛋白α2β1的表达，进而增强了细胞与胞外Ⅱ型胶原的黏附作用。