腺病毒介导BMP-2/7共表达转染兔滑膜MSCs体外向纤维软骨样细胞分化的研究

符培亮   张 雷   吴海山   丛锐军    陈 松   丁喆如    胡凯猛

目的通过使用腺病毒介导BMP-2/7共表达载体转染兔滑膜MSCs（synovial-derived MSCs，SMSCs），观察其在体外向纤维软骨样细胞分化的可行性。 方法取3月龄新西兰大白兔6只，雌雄不限，体重（2.1 ± 0.3） kg；取滑膜组织分离纯化SMSCs后，进行形态学观察及免疫细胞荧光染色、流式细胞仪、细胞周期鉴定，并检测其成脂、成骨、成软骨多向分化潜能。同时包装pAdTrack-BMP-2-内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site，IRES）-BMP-7腺病毒载体，转染SMSCs后进行增殖动力学、核型分析、流式细胞仪检测细胞DNA含量、致瘤性分析等安全性鉴定。体外在不完全成软骨培养基中培养，观察其分化状态，并行RT-PCR检测、免疫荧光染色及甲苯胺蓝染色检测。 结果从兔滑膜组织中分离出的SMSCs，其细胞形态、表面标记、多向分化潜能等均符合MSCs的特点。pAdTrack-BMP-2-IRES-BMP-7转染SMSCs的转染率约为70%。安全性鉴定结果显示转染后的SMSCs倍增时间、染色体数目及DNA含量均正常，且无致瘤性。体外不完全成软骨培养基诱导培养21 d后，RT-PCR检测示SMSCs 的Ⅰ、Ⅱ型胶原表达明显增加，以Ⅱ型胶原为主；软骨分化信号分子RhoA与Sox-9的表达经诱导后也明显增加。免疫荧光染色及甲苯胺蓝染色结果亦显示转染后的SMSCs向纤维软骨样细胞分化。 结论使用腺病毒载体安全有效，可在体外定向诱导兔SMSCs向纤维软骨样细胞分化。