戴丽冰 刘志河 梁伟国 姚依村 徐家科 叶冬平 邹隆强 沈雁
目的:探讨维生素C（Vitamin C，Vit C）在TNF-α及血清剥夺诱导人椎间盘髓核细胞凋亡中的作用及机制。
方法:取脊柱矫形手术患者的髓核组织，消化法获得正常髓核细胞，取第3代细胞按不同处理因素分为Vit C作用组（A组）、TNF-α诱导组（B组）和血清剥夺组（C组），每组再分为以下亚组：A组分为A1组（基础培养液）、A2组（100 μg/mL Vit C）、A3组（200 μg/mL Vit C）；B组分为B0组（对照组）、B1组（100 ng/mL TNF-α）、B2组（100 μg/mL Vit C+100 ng/mL TNF-α）、B3组（200 μg/mL Vit C+100 ng/mL TNF-α）；C组分为C0组（对照组）、C1组（FBS浓度由8%降低为2%）、C2组（2%FBS+100 μg/mL Vit C）、C3组（2%FBS+200 μg/mL Vit C）。各组作用24 h后，采用流式细胞术检测各组膜联蛋白V、碘化丙啶双染后髓核细胞凋亡率；实时荧光定量PCR检测p53（基因编码相对分子质量为53×103的蛋白质）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 （Caspase 3）、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Sox9和糖胺多糖（Aggrecan）mRNA表达。
结果:A组：与A1组比较，A2、A3组的Vit C均能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达（P<0.05），但A2、A3组间比较差异无统计学意义（P>0.05）；A2、A3组的Vit C可促进髓核细胞Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Aggrecan、Sox9 mRNA表达，且A3组促进作用显著大于A2组（P<0.05）。B组：与B0组比较，B1组TNF-α促进了髓核细胞凋亡，增加了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达（P<0.05）；与B1组比较，B3组的Vit C能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达，而B2组的Vit C则增加其凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达，差异均有统计学意义（P<0.05）。C组：与C0组比较，C1组2%FBS能诱导髓核细胞凋亡，但降低了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达（P<0.05）；与C1组比较，C3组的Vit C能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 mRNA表达，而C2组的Vit C则增加其凋亡及p53、FAS mRNA表达，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论:Vit C能延缓或降低髓核细胞凋亡、促进细胞外基质合成与分泌，200 μg/mL Vit C可延缓或降低100 ng/mL TNF-α和2%FBS诱导的凋亡，而100 μg/mL Vit C则促进其诱导的凋亡。
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