抑制肌动蛋白聚合对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞成脂分化的影响研究

陈波　　唐康来　　张吉强　　郭宇鹏　　刘翔周　　施又兴

　　目的:探讨细胞骨架重塑对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞（tendon stem cells，TSCs）成脂分化的影响。

　　方法:取3周龄雄性SD大鼠跟腱组织，采用酶消化法分离、培养TSCs，取第3代细胞用于实验。将细胞分别以细胞松弛素D（cytochalasin D，CYD）终浓度为0、50、100、500、1 000 ng/mL的含15%FBS的DMEM培养基进行培养，倒置相差显微镜下观察细胞存活及形态变化，纤维肌动蛋白（fibros actin，F-actin）染色观察细胞骨架，Western blot检测F-actin/球状肌动蛋白（globular actin，G-actin）比值，根据结果选择CYD有效使用浓度进行后续实验。取TSCs分别采用成脂诱导培养基（诱导组）、含CYD的成脂诱导培养基（CYD+诱导组）以及普通培养基（普通组）、含CYD的普通培养基（CYD+普通组）培养3、7 d，收集各组细胞行实时荧光定量PCR检测成脂分化相关特异标志性基因表达，包括过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ）、脂蛋白酯酶（1ipoprotein lipase, LPL）、脂肪酸结合蛋白(aP2)，Western blot检测PPARγ、aP2蛋白表达。

　　结果:CYD浓度为100 ng/mL时既能有效干扰TSCs细胞骨架F-actin的聚合，又不影响TSCs的存活，选择该浓度进行后续实验。实时荧光定量PCR及Western blot检测示，3、7 d时CYD+诱导组PPARγ、LPL和aP2基因及PPARγ、aP2蛋白表达均显著高于诱导组，比较差异有统计学意义（P<0.05）。3、7 d时CYD+普通组PPARγ、LPL和aP2基因表达也显著高于普通组，比较差异有统计学意义（P<0.05）。

　　结论:细胞骨架重塑是TSCs成脂分化的一个先决条件，抑制F-actin聚合可促进TSCs的成脂分化，对肌腱病的发病机制研究具有重要意义。