彭伟 黄迅悟 赵伟鹏 赵铭 杨大志
目的：比较不同 EWS / FLI-1 蛋白 HLA-A / 0201 限制性表位肽对尤文肉瘤树突状细胞 ( dendritic cell，DC ) 疫苗的抗肿瘤作用。
方法：综合运用 BIMAS、SYFPEITHI 软件筛选与人白细胞抗原 HLA-A / 0201 结合力强的 EWS / FLI-1 蛋白 9 肽表位，并合成其表位肽。采用 4 h 标准 51Cr 释放实验检测刺激细胞毒性 T 淋巴细胞 ( cytotoxic T lymphocytes，CTLs ) 对肿瘤细胞的杀伤效应。应用酶联免疫斑点法 ( enzyme linked immunospot assay，ELISPOT ) 检测表位肽对 DC 疫苗刺激的效应细胞 γ-干扰素 ( interferon，IFN-γ ) 的释放。在此基础上，进行免疫治疗的动物实验，比较其体内抗肿瘤作用。
结果：筛选出 EWS 306、EWS 289 及 EWS 401 与 HLA-A / 0201 具较强的结合性，其合成出的表位肽分别为：QLWQFLLEL ( EWS 306 )、ILGPTSSRL ( EWS 289 ) 和 SMYKYPSDI ( EWS 401 )。3 组表位肽均有较强的杀伤力，当效－靶比为 50∶1 时，杀伤率 EWS 306 组 ( 20.2±1.8 ) %、EWS 289 组 ( 12.6±0.3 ) %、EWS 401 组 ( 11.9±0.2 ) %，而对照组为 ( 6.7±0.1 ) %；当效－靶比为 100∶1 时，表位肽的三组杀伤作用明显提升，杀伤率 EWS 306 组最高为 ( 51.2±3.7 ) %、EWS 289 组 ( 24.6±2.1 ) %、EWS 401 组 ( 17.8±0.9 ) %，对照组为 ( 7.2±0.2 ) %。EWS 306 组同其它组比较，差异有统计学 ( P＜0.05 )。EWS 306 组分泌的 IFN-γ 为 ( 118.3±3.6 ) 个点明显高于 EWS401 组 ( 35.1±1.0 ) 个和 EWS 289 组 ( 34.2±0.9 ) 个，对照组为 ( 5.0±0.1 ) 个 ( P＜0.05 )。EWS 306 组肿瘤的体积 ( 978.9±28.2 ) mm3 明显小于阴性对照组 ( 1992.9±16.1 ) mm3 和空白对照组 ( 2001.9±12.3 ) mm3 ( P＜0.05 )。接种后第 35 天，EWS 306 组存活率为 80% 大于空白对照组为 0%、阴性对照组为 10% ( P＜0.05 )；接种后第 40 天，空白对照组降为 0%，EWS 306 组为 80% 明显大于和 2 个对照组 ( P＜0.05 )。
结论：EWS / FLI-1 蛋白表位肽中 EWS 306 较 EWS 289 和 EWS 401 对 DC 的抗肿瘤作用更强，能够有效激活 CTLs 对肿瘤细胞的杀伤效应，为尤文肉瘤的免疫治疗提供了新的方向。
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