基于兔BMSCs预血管化细胞膜片的体外构建

冯玉霞　　汪洋　　李琴　　马东洋　　任利玲

　　目的：探讨构建预血管化细胞膜片新方法的可行性。

　　方法：取3周龄日本大耳白兔分离培养BMSCs，并在VEGF和bFGF作用下诱导其向血管内皮样细胞（endothelial like cells，ECs）分化（实验组），以未诱导细胞作为对照组，倒置显微镜下观察细胞形貌，并行血管性假血友病因子（von Willebrand factor，vWF）及CD31免疫荧光染色观察。将第2代BMSCs以9 × 104个/cm2密度体外培养14 d形成未分化细胞膜片，将BMSCs诱导14 d获得的ECs以5 × 104 个 / cm2密度接种在细胞膜片上（A组）培养3、7、14 d，以单纯未分化的兔BMSCs膜片为B组，BMSCs诱导14 d获得的ECs单独培养为C组。倒置显微镜下观察血管网络形成，并行CD31免疫荧光染色及组织学观察。

　　结果：原代BMSCs呈长梭形；诱导分化后细胞形态发生改变，呈“铺路石”样。实验组vWF及CD31免疫荧光染色均呈阳性，而对照组均呈阴性。A组BMSCs诱导14 d后的ECs接种至未分化的BMSCs膜片上3、7、14 d后，细胞形态发生改变，镜下可见空泡样、网状结构形成；CD31免疫荧光检测显示了进行性管腔形成过程；HE染色显示了微血管管腔的形成。B、C组未观察到类似改变。

　　结论：BMSCs在合适条件下可诱导形成ECs；将由BMSCs诱导分化形成的ECs接种至未分化BMSCs膜片上，可在体外形成具有血管网络结构的预血管化膜片，为工程化血管组织构建提供了新方法。