王运涛 吴小涛 王锋 洪鑫 鲍军平 朱磊
目的:探讨在过早衰老髓核细胞（nucleus pulposus cells，NPCs）微环境中BMSCs的生物学行为，为充分利用BMSCs干细胞特性进行退变椎间盘修复奠定实验基础。
方法:收集人退变髓核组织与正常骨髓组织进行NPCs、BMSCs分离、培养及鉴定；对过早衰老诱导的第1代NPCs和正常第3代BMSCs行非接触共培养，根据NPCs与BMSCs不同比例将实验分为A组（75%∶25%）、B组（50%∶50%）和C组（0∶100%）。倒置相差显微镜和透射电镜观察各组BMSCs形态变化；对培养3、6 d的BMSCs进行增殖能力检测：细胞计数试剂盒8检测细胞活力、流式细胞仪检测细胞周期、BrdU标记流式检测DNA代谢；培养6 d检测衰老相关β半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase，SA-β-gal）活性评价细胞衰老。
结果:倒置相差显微镜示A、B组BMSCs中混杂的三角形或大多角形细胞增多，尤其是A组；透射电镜观察A、B组均可见典型衰老形态的细胞。培养3、6 d，A组细胞存活率均显著低于B组，差异有统计学意义（P < 0.05）。3 d时，A组G1期细胞比例明显高于B、C组（P < 0.05），S期细胞比例明显低于B、C组（P < 0.05）。6 d时，A组约81.0%细胞停滞于G1期，S期及G2期细胞比例减小，与B、C组比较各细胞周期分布差异均有统计学意义（P < 0.05）；B组细胞停滞于G1期比例增加至约74.4%，与C组比较各细胞周期分布差异均有统计学意义（P < 0.05）。培养3、6 d，A组掺入的BrdU含量均明显低于B、C组（P < 0.05）；B、C组间3 d时差异无统计学意义（P > 0.05），6 d时B组明显低于C组（P < 0.05）。培养6 d，A、B组SA-β-gal活性显著提高，3组间比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。
结论:过早衰老的NPCs可通过旁分泌效应下调共培养的BMSCs增殖能力，而NPCs数量上的优势使得共培养的BMSCs更早表现出衰老特征。
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