成骨分化的人脐带血间充质干细胞免疫原性研究

杨大威   林和敏   刘广鹏

　　目的:研究经成骨诱导分化的人脐带血间充质干细胞（umbilical cord blood derived mesenchymal stem cells，UCB-MSCs）表面免疫分子的表达以及体外调节T淋巴细胞增殖反应的功能。

　　方法:取自愿捐赠的脐静脉血分离获取UCB-MSCs，体外扩增至第3代，行成骨诱导培养2周。流式细胞仪检测成骨诱导分化前后UCB-MSCs免疫分子人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）Ⅰ类分子、HLA-Ⅱ类分子的表达。首先以成骨分化的UCB-MSCs刺激异体T淋巴细胞增殖，未诱导的UCB-MSCs设为对照。共设立UCB-MSCs 1 × 102、1 × 103、1 × 104和1 × 105个/孔4种不同细胞密度，分为IFN-γ预处理组和未处理组。然后以植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）刺激T淋巴细胞增殖，分别加入上述不同数量级的未诱导与成骨诱导分化的UCB-MSCs，观察对T淋巴细胞增殖的影响，并同时加入IL-2检测对UCB-MSCs抑制T淋巴细胞增殖作用的逆转。最后建立Transwell共培养体系，研究成骨诱导分化的UCB-MSCs对混合T淋巴细胞反应的抑制作用是否为接触抑制性。

　　结果:未诱导的UCB-MSCs高表达HLA-Ⅰ类分子，不表达HLA-Ⅱ类分子；经成骨诱导分化的UCB-MSCs HLA-Ⅱ类分子的阳性表达率升高。未诱导的UCB-MSCs对异体T淋巴细胞增殖有显著抑制效果，而成骨诱导分化的UCB-MSCs对T淋巴细胞增殖的抑制作用明显减弱（且无细胞数量依赖性），并且在IFN-γ作用后，有刺激T淋巴细胞增殖的效果。密度为1 × 104个/孔及1 × 105个/孔时未诱导的UCB-MSCs可抑制PHA刺激的T淋巴细胞增殖，但加入IL-2后该抑制作用被逆转；而成骨诱导分化的UCB-MSCs则不具有抑制T淋巴细胞增殖的作用。Transwell共培养结果表明，与直接接触培养相似，未诱导的UCB-MSCs可显著抑制T淋巴细胞增殖反应，而成骨诱导分化的UCB-MSCs抑制能力明显减弱。

　　结论:经成骨诱导分化的UCB-MSCs抑制混合T淋巴细胞增殖反应的效果明显低于未经成骨诱导分化的UCB-MSCs，不适合作为骨组织工程或细胞治疗的同种异体种子细胞来源。