华蟾酥毒基诱导骨肉瘤细胞凋亡的体外实验研究

尹军强　谢显彪　温丽丽　黄纲　王博　王晋　沈靖南

　　目的:研究华蟾酥毒基(cinobufagin)对多种骨肉瘤细胞系的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其相关机制.

　　方法:不同浓度的华蟾素毒基分别处理骨肉瘤细胞系U2OS、MG63和SaO2后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同骨肉瘤细胞系的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞核荧光染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,Western blot检测IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP、xIAP、cIAP-1、survivin及p65的表达.

　　结果:MTT检测显示,华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞U2OS、MG63和SaO2的增殖,其抑制细胞增殖的作用呈剂量和时间依赖性,其对U2OS、MG63和SaO2细胞的48 h IC50值分别为(104.83±16.96) nmol/L、(47.07±7.5) nmol/L和(136.72±10.08)nmol/L.100 nmol/L华蟾酥毒基处理骨肉瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测可见骨肉瘤U2OS、MG63和SaO2的GdG1期细胞比例下降,GJM期细胞比例增加,表明华蟾素毒基主要通过将细胞阻滞在GJM期,以抑制骨肉瘤细胞的增殖.进一步Hoechst 33258细胞核染色发现,华蟾素毒基可诱导骨肉瘤细胞产生典型凋亡小体,Annexin V/PI检测100 nmol/L华蟾酥毒基作用48 h后,U2OS、MG63和SaO2细胞凋亡率分别为33.6％±6.4％、36.4％±7.8％及29.3％±5.1％.表明华蟾酥毒基的抗骨肉瘤效果是通过诱导骨肉瘤细胞凋亡来实现.在探讨其诱导骨肉瘤细胞凋亡的相关机制中,通过Western blot检测发现其诱导凋亡的作用机制是通过上调IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP,下调xIAP、cIAP-1、survivin及p65蛋白来实现.

　　结论:华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞株U2OS、MG63和SaO2细胞增殖,阻滞细胞在G2/M期,并诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用机制为调节IAPs和Bcl-2凋亡相关家族蛋白的活性.