乳腺外科表皮葡萄球菌icaA、icaD及聚集相关蛋白基因对细菌生物膜形成的影响

汤 琦    袁 兵    黄云超    郭凤丽    雷玉洁

     目的:探讨乳腺外科表皮葡萄球菌icaA、icaD和聚集相关蛋白（accumulation-associated protein，aap）基因对细菌生物膜形成的影响。

     方法:于2011年12月－2013年1月乳腺外科收治的无感染症状女性患者临床标本中分离获得44株表皮葡萄球菌。PCR检测菌株icaA、icaD、aap基因，并根据基因表达结果将其分为icaA+icaD+/aap+组（A组）、icaA+icaD+/aap-组（B组）、icaA-icaD-/aap+组（C组）及icaA-icaD-/aap-组（D组）。取4组菌株制备硅胶材料表面细菌生物膜体外模型，于孵育8、12、24、30、36 h采用结晶紫染色法半定量检测细菌黏附能力，孵育12、24 h激光共聚焦显微镜观测形成的生物膜厚度，孵育24 h扫描电镜观察细菌生物膜超微结构。

     结果:PCR检测结果示，44株表皮葡萄球菌中，13株为icaA+icaD+/aap+（A组），12株为icaA+icaD+/aap-（B组），16株为icaA-icaD-/aap+（C组），3株为icaA-icaD-/aap-（D组）。共29株（65.9%）形成细菌生物膜，其中A组13株，B组7株，C组9株，D组0株。半定量黏附实验示：孵育8 h，4组细菌黏附能力比较差异无统计学意义（P > 0.05）；12～36 h时，A、B、C组黏附能力均显著高于D组，A组显著高于B、C组（P < 0.05），B、C组间比较差异均无统计学意义（P > 0.05）。激光共聚焦显微镜观察示，12、24 h时A、B、C组细菌生物膜厚度均大于D组，A组明显大于B、C组（P < 0.05）；B、C组间比较差异无统计学意义（P > 0.05）。扫描电镜观察示，孵育24 h时A、B、C组硅胶片表面均可见成熟的细菌生物膜结构，其中A组细菌生物膜分布最广泛、结构最致密、层次最丰富， B、C组细菌生物膜结构相似；D组无明显细菌生物膜形成。

     结论:icaA、icaD基因及aap 基因对表皮葡萄球菌在硅胶表面的细菌生物膜形成均起重要作用，其中aap基因与icaA、icaD基因同时表达的菌株具有最强的细菌生物膜形成能力。