锂剂对神经干细胞分化的影响及相关机制探究

朱振中   贺西京   金东旭   历 强   张长青

【摘要】 目的：探讨锂剂对神经干细胞（neural stem cells，NSCs）分化的调控作用及机制，为优化NSCs移植治疗SCI疗效提供理论基础。方法：以Fischer 344新生大鼠侧脑室下区培养的NSCs为细胞模型，首先采用Cyquant DNA定量法测定对照组及0.5、1、3、5mM锂剂处理组在分化条件下的生长曲线；同时结合星形胶质细胞（AST）标记物GFAP及S100β，行神经元标记物Tuj1细胞免疫化学染色，应用Western Blotting蛋白定量法检测不同浓度锂剂对NSCs分化终产物中神经元及AST总量的影响，同时采用TUNEL凋亡检测法寻找锂剂的非毒性浓度区间，以排除混杂因素。最后通过与其下游经典作用通路GSK3β抑制剂SB216763对NSCs增殖、分化、凋亡的作用比较，探究锂剂的可能作用机制。结果：TUNEL凋亡检测显示体外锂剂的非毒性浓度区间为（0～3mM）；在此范围内，1mM锂剂处理组中Tuj+细胞总数较对照组提高约1.47±0.06倍（P<0.05），SB216763处理组Tuj+细胞总数提高约2.25±0.07倍（P<0.05）；3mM锂剂处理组中GFAP+细胞总数为对照组的0.55±0.02倍（P<0.05），S100β与GFAP染色结果趋势一致，SB216763处理组中GFAP+细胞总数为对照组的0.90±0.06倍（P>0.05）。结论：锂剂可明显促进NSCs向神经元方向分化并AST的分化，其最佳作用浓度分别为1mM及3mM，前者可能是通过锂剂下游经典作用通路GSK3β实现，而后者可能通过GSK3β旁路途径实现。