重组人BMP-2调节VEGF表达的浓度和时间依赖性研究

曹鑫       陈慧锦      崔正礼     金格勒      杨毅     王亚楠       肖伟

摘要:目的通过基因水平和蛋白水平研究不同诱导浓度以及不同诱导时间重组人BMP-2（recombinant human BMP-2,rhBMP-2）调节人脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）表达VEGF的生物学特点.方法从成人脂肪组织中分离培养ADSCs.取第3代细胞,分别用终浓度为0、50、100、200 ng/mL rhBMP-2诱导，24 h后收集样本；另采用浓度为100 ng/mL rhBMP-2诱导（rhBMP-2诱导组），3、6、12、18、24、36、48 h后收集样本，并设未诱导的相应时间点细胞作为对照组；采用RT-PCR和ELISA检测VEGF mRNA和蛋白表达。 结果RT-PCR及ELISA检测示，不同浓度rhBMP-2诱导下VEGF mRNA相对表达量和蛋白表达均呈浓度依赖性，其中100 ng/mL组表达最高。50、100、200 ng/mL组VEGF mRNA相对表达量均高于0 ng/mL组（P < 0.05）；100 ng/mL组VEGF mRNA相对表达量最高，与其余两组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。100 ng/mL组VEGF蛋白表达量显著高于其余各组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。100 ng/mL rhBMP-2诱导ADSCs后VEGF mRNA及蛋白表达呈时间依赖性。rhBMP-2诱导组诱导3、6 h时VEGF mRNA相对表达量及蛋白表达均低于对照组（P < 0.05）；12 h时VEGF表达较低，两组比较差异无统计学意义（P > 0.05）；18、24 h达高峰，rhBMP-2诱导组显著高于对照组（P < 0.05）；36、48 h 两组VEGF表达均明显减少，比较差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论rhBMP-2调节人ADSCs表达VEGF具有浓度依赖性和时间依赖性。rhBMP-2最适诱导浓度为100 ng/mL，诱导至18～24 h是利用rhBMP-2促进组织工程骨血管化的关键时间段。