靶向糖原合成酶激酶-3β抗骨肉瘤的实验研究

谢显彪      唐清连      王晋      黄纲      尹军强      邹昌业     沈靖南

摘要： 目的 研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)在骨肉瘤细胞增殖中的作用及相关分子机制,探讨其在骨肉瘤靶向治疗中的价值.方法 Western blot检测人成骨细胞及骨肉瘤细胞p-GSK-3β (Ser9)表达水平,观察GSK-3β抑制剂及siRNA干扰对细胞增殖、凋亡的影响,利用凋亡蛋白芯片筛查并验证GSK-3β调控骨肉瘤细胞的分子机制,通过裸鼠体内实验评估靶向GSK-3β对于骨肉瘤的治疗价值.结果 在骨肉瘤细胞中p-GSK-3β (Ser9)表达水平明显低于成骨细胞.GSK-3β特异性抑制剂及siRNA 干扰均可明显抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡蛋白cleave-caspase 3表达量明显上调.通过蛋白芯片筛查显示一组NF-κB调控的靶基因蛋白survivin、cIAP-1、XIAP及Bcl-2明显下调.Western blot验证了上述芯片结果,并发现氯化锂处理后p-IκBo水平下降,核内NF-κB p65表达量下降.NF-κB双荧光素酶报告系统检测稳定过表达持续活化GSK-3β细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显升高,而稳定干扰GSK-3β的细胞中NF-κB转录活性与空载体组细胞相比明显下降.裸鼠体内动物实验发现稳定干扰GSK-3β和采用氯化锂均可明显抑制骨肉瘤皮下移植瘤的生长.结论 GSK-3β在骨肉瘤中处于相对活化状态,可通过上调NF-κB转录活性调控骨肉瘤细胞增殖；靶向GSK-3β是骨肉瘤潜在的治疗新策略.