人孤雌胚胎干细胞无饲养层培养体系的建立

梁锐    王志强    陈天星   朱静   朱姝   李英   杨龙   朱宝生

摘 要: 目的建立一种安全、有效、经济且适于人孤雌胚胎干细胞（human parthenogenetic embryonic stem cells，hPESCs）体外培养的无饲养层培养体系。 方法将常规体外培养的hPESCs分别以mTeSRTMl培养基（对照组）和人包皮成纤维细胞的条件培养基（human foreskin fibroblasts-conditional medium，hFFs-CM）（实验组）扩增培养，倒置显微镜下观察两组无饲养层培养体系下hPESCs的生长状态；采用ALP检测和核型分析研究hPESCs生物学特性；采用RT-PCR检测hPESCs全能性标记物Oct-4的表达情况；通过体外和体内分化实验观察hPESCs向3个胚层分化的潜能。 结果两组hPESCs形态规则、不易分化，在形态、扩增速度等方面无明显差异；已成功在体外培养15代，两组均能保持正常女性的二倍体核型46，XX和全能性；RT-PCR检测示两组Oct-4 mRNA均呈阳性表达；体外分化均可形成拟胚体；在裸鼠体内均可形成含有3个胚层组织成分的畸胎瘤。 结论hFFs-CM无饲养层培养体系可长期支持hPESCs的生长并维持其未分化状态，成功建立了一种不仅能维持hPESCs的有效扩增、减少动物源性污染、降低培养成本，还可满足临床大规模应用的hPESCs无饲养层培养体系。