转化生长因子β1联合软骨源性形态发生蛋白-2体外诱导成肌细胞 向软骨细胞的分化

顾羊林     朱国兴     施克勤     杨玉生     陈鹏     朱文辉     王予彬

       摘要  目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）联合软骨源性形态发生蛋白-2（CDMP-2）体外诱导犬成肌细胞向软骨细胞表型定向分化的可行性。方法：取成年比格犬大腿股直肌肌肉，以机械分解法与二步酶消化法分离获得成肌细胞，取第4代成肌细胞，以2.0×104细胞/cm2的密度接种于24孔培养板，使用含CDMP-2和（或）TGF-β1的完全培养液诱导分化成肌细胞，观察细胞生长情况。诱导14 d后获取细胞，进行HE染色、甲苯胺蓝染色，观察细胞形态及胞内高硫酸化的蛋白聚糖变化。免疫细胞化学染色检测11型胶原蛋白着色情况。RT-PCR检测I型、II型胶原蛋白、aggrecan及Sox9 mRNA表达。阿尔新兰法定量检测细胞糖胺聚糖（GAG）含量。结果：3个加入细胞因子的实验组成肌细胞形态由长梭形向多角形、类圆形转变；HE染色、甲苯胺蓝染色和软骨特异性I型和Ⅱ型胶原疫组化法检测及RT-PCR检测中，均有不同程度的阳性表达；TGF-β1与CDMP-2联合应用组糖胺聚糖含量明显高于其他三组（P < 0.05）。结论：CDMP-2和TGF-β1可以单独诱导高密度单层培养的犬成肌细胞向软骨细胞分化，表达软骨细胞特异性细胞表型，并且CDMP-2和TGF-β1有协同作用。