人诱导性多能干细胞的无饲养层培养及鉴定

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人诱导性多能干细胞的无饲养层培养及鉴定

第一作者:王欢 编号 : #126590#
2016-01-29
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王欢  方煌  李潇  高书涛  周传坤  邹银双  李锋


目的 探索人诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)的无饲养层培养方法,并对此方法培养的iPSCs进行鉴定。


方法  将人iPSCs接种于玻璃粘连蛋白(Vitronectin XF)包被的培养皿上培养,采用EDTA消化传代。倒置显微镜下观察iPSCs的生长状态;碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定;采用PCR和免疫荧光检测iPSCs多能性基因SSEA⁃1、Nanog、Sox2的表达情况。


结果 倒置显微镜下可见iPSCs呈典型的克隆状生长,克隆呈圆形或椭圆形,边界清晰、整齐;ALP染色结果阳性;PCR结果显示人iPSCs强表达多能性基因SSEA⁃1、Nanog、Sox2;免疫荧光结果显示多能干细胞特异性指标SSEA⁃1、Nanog、Sox2均呈阳性。


结论 无饲养层培养体系培养人iPSCs,细胞能稳定增殖,保持自我更新潜能及多能性。

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