感觉神经肽P物质激活Wnt/β-catenin信号通路促进间充质干细胞增殖的实验研究

喻伟  程鹏  黄晖  黄鑫  陈安民

目的  探讨感觉神经肽P物质（substance P, SP）对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖的影响并初步揭示其中可能的机制。

方法  体外培养SD（Sprague-Dawley）大鼠BMSCs。细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8)法检测不同浓度SP刺激下的BMSCs增殖活性；在10^-8 mol/L的SP刺激下，采用实时荧光定量PCR（real-time qPCR，RT-qPCR）检测第1、3、5和7 天时Wnt/β-catenin信号通路相关基因（β-catenin、c-myc、cyclin D）的表达情况。SP组单纯添加10-8 mol/L的SP，SP+LiCl（糖原合成激酶-3的抑制剂LiCl）组在SP组基础上添加6×10^-3 mol/L的LiCl，SP+Dkk-1 (Dickkopf-1)组在SP组基础上添加10^-9 mol/L的Dkk-1，以添加等量聚丁烯琥珀酸酯(poly butylenes succinate，PBS)为空白对照组。

结果  CCK-8法显示SP明显促进BMSCs增殖，以10^-8 mol/L的SP作用最为显著。RT-qPCR结果显示SP刺激下，β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA表达有显著差异，10^-8 mol/L的浓度差异最为显著，并且呈明显的时间依赖，第5天mRNA表达出现顶峰。并且SP+LiCl组β-catenin、c-myc、cyclin D的mRNA和蛋白水平显著增强，而SP+Dkk-1组明显抑制。

结论  SP通过激活Wnt/β-catenin通路而显著促进BMSCs增殖。