郑伟伟 杨民 武成 苏显林
目的: 探讨大鼠滑膜间充质干细胞（synovium-derived mesenchymal stem cells，SMSCs）生物学特性及诱导成骨的可行性，评估SMSCs复合羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸（hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid，HA/CS/PLLA）支架材料在体内异位成骨能力。
方法: 采用酶消化法和贴壁法分离培养SMSCs，并利用流式细胞仪检测细胞表型，SMSCs成脂及成骨诱导后分别行油红O染色、ALP染色和茜素红染色鉴定。取第3代SMSCs，成骨诱导1、7、14、21、28 d后，采用实时荧光定量PCR检测骨钙素（osteocalcin，OCN）、Ⅰ型胶原、ALP以及Runx- 2 mRNA表达情况；成骨诱导后1、3、5、7、9、11 d，采用ELISA法检测ALP活性；成骨诱导后7、14、21、28 d，采用茜素红S法检测钙盐沉积；以正常培养SMSCs作为对照组。体内实验：取SD大鼠24只，随机分为实验组和对照组（n=12）；取第3代SMSCs接种于HA/CS/PLLA支架材料，体外复合培养72 h后植入实验组大鼠右下肢肌袋，对照组大鼠植入单纯HA/CS/PLLA支架材料；术后4、8周通过X线片及组织学观察分析SMSCs体内成骨情况。
结果: 提纯后SMSCs CD147、CD90、CD105、CD44表达超过95%，而CD117、CD34、CD14、CD45表达低于10%；油红O染色可见红色脂滴形成，茜素红染色可见红色钙化灶，ALP染色可见细胞质呈咖啡样深染。实时荧光定量PCR检测示，SMSCs成骨诱导7 d，Ⅰ型胶原、ALP、Runx-2 mRNA表达显著增加，诱导14 d OCN mRNA表达显著增加。成骨诱导后5、7、9、11 d ALP活性明显高于对照组，7 d时达峰值（P<0.05）。成骨诱导14 d，钙含量显著增加，且随诱导时间延长钙含量逐渐增加（P<0.05），且均高于对照组（P<0.05）。体内实验术后4、8周影像学和组织学观测结果显示，两组均可见新生骨形成，但实验组成骨量明显多于对照组（P<0.05）。
结论: SMSCs在体内、体外均可诱导成骨，可成为骨组织工程的种子细胞。
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