基于TMT标记联合LC-ESI-MS／MS技术筛选绝经后骨质疏松症的血清分子标志物研究

史晓林  梁博程  姚建亮  李春雯  施振宇  李旭云

目的:应用串联质量标签（tandem mass tag，TMT）标记联合高效液相色谱一质谱／质谱法（LCESI-MS／MS）技术鉴定绝经后骨质疏松患者和绝经后骨量正常妇女血清差异蛋白质，筛查绝经后骨质疏松症的血清蛋白分子标志物。

方法:回顾性分析2013年3月至2014年3月初次诊断10例绝经后骨质疏松妇女及10例绝经后骨量正常妇女资料，分别获取血清，经去除m清高丰度蛋白、测定蛋白浓度、SDS-PAGE蛋白提取测定和TMT标签标记等过程后，进行高效液相串联质谱肽段检测，Mascot search engine软件搜索SwissProt蛋白质数据库鉴定多肽，筛选差异表达的蛋白，进行生物信息学分析。

结果:从经TMT标记联合LC-ESI-MS／MS技术鉴定的蛋白质表达谱中共筛选出差异表达蛋白87个（上调蛋白50个，下调蛋白37个）。对差异表达蛋白进行GO基因注释分析，发现其主要参与15种生物学过程，主要来自7种细胞组成，主要具有6种分子功能；初步筛选H1与骨质疏松骨重建相关的RAB7A、TSPI、GAS6、SPP24共4个候选蛋白。通过STRING10．0蛋白相互作用网络分析T具发现RAB7A、TSPI、GAS6在相互作用网络图中处于功能网络交叉点；而SPP24处于网络边缘，但是其与骨重建重要蛋白BMP-2直接相关。这些差异表达的蛋白RAB7A、TSPl、GAS6、SPP24与绝经后骨质疏松症的发病机制有关。

结论:本研究证明基于TMT标记联合LC-ESI-MS／MS技术可作为鉴定筛选绝经后骨质疏松症血清蛋白分子标志物的有效方法；RAB7A、TSPl、GAS6、SPP24可能是绝经后骨质疏松症的潜在有效血清分子标志物。