兔坐骨神经匀浆上清液对脂肪干细胞的诱导分化作用

赵斌　　马信龙　　孙晓雷　　李秀兰　　张杨　　郭悦　　杨强

　　目的:探讨兔坐骨神经匀浆上清液对脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）的诱导分化作用。

　　方法:取4月龄健康新西兰大白兔（体重2.0~2.5 kg）体外分离、培养ADSCs并传至第3代；用bFGF预诱导后，加入正常坐骨神经匀浆上清液（B组）及损伤3、7、14 d的坐骨神经匀浆上清液（分别为C、D、E组）对其进行诱导，空白对照组（A组）仅加入D-Hank液。观察细胞形态变化，并采用实时荧光定量PCR检测各组细胞神经组织蛋白（S-100）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）及巢蛋白（Nestin）基因表达，免疫细胞化学染色检测S-100蛋白表达。

　　结果:C、D、E组细胞经诱导后逐渐出现雪旺细胞或神经细胞样形态改变，以D组变化最为明显；A、B组细胞形态未见明显改变，仍以梭形为主。S-100免疫细胞化学染色示，C、D、E组染色均为阳性，以D组阳性细胞最多；A、B组细胞无阳性表达。实时荧光定量PCR检测示，S-100基因表达量随损伤时间延长呈上升趋势，C、D组达高峰，之后缓慢下降；C、D组表达量显著高于A、B、E组（P<0.05），C、D组间差异无统计学意义（P>0.05）。NSE基因表达量呈相同趋势，D组达高峰，之后缓慢下降；D、E组表达量显著高于A、B、C组（P<0.05），D、E组间差异亦有统计学意义（P<0.05）。Nestin基因表达量各组间差异无统计学意义（P>0.05）。

　　结论:兔损伤坐骨神经匀浆上清液在体外能够有效诱导ADSCs分化为雪旺细胞和神经细胞，伤后早期（3～7 d）可作为细胞移植的最佳时间。