BMP-12重组腺病毒载体转染外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化研究

付维力　　陈刚　　唐新　　李棋　　李箭

　　目的:探讨携带BMP-12基因的腺病毒载体转染诱导外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化的效果。

　　方法:取3～4月龄新西兰兔外周血，体外分离培养外周血MSCs至第3代。采用AdEasy腺病毒载体系统制备BMP-12重组腺病毒载体。将BMP-12重组腺病毒体体外转染第3代外周血MSCs，转染后24 h通过流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测转染效率，倒置相差显微镜观察细胞形态变化，转染后8、24 h在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）表达；转染后0、7、14 d，采用免疫组织化学染色观察I型胶原表达情况；实时定量PCR检测肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin mRNA表达水平，并设未转染细胞作为对照组。

　　结果:转染后24 h，倒置相差显微镜观察示细胞生长增殖缓慢，细胞形态清晰；FCM检测示，转染组转染效率为99.57%，未转染组为2.46%；转染后8 h，荧光显微镜下即可见GFP表达，随培养时间延长GFP表达逐渐增多，24 h时几乎所有细胞均可见GFP表达。免疫组织化学染色示，随转染时间延长，Ι型胶原表达逐渐增强；转染组转染后14 d，肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin mRNA表达水平分别为0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067，均显著高于未转染组的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024，差异有统计学意义（t= — 7.700，P=0.031；t= — 5.741，P=0.020；t= — 12.998，P=0.000）。

　　结论:BMP-12重组腺病毒载体可明显促进外周血MSCs向肌腱/韧带成纤维细胞表型分化，并促进肌腱/韧带特异基因表达和细胞外基质产生，为外周血MSCs用于肌腱/韧带再生提供了依据。