miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的研究

宋志芳　刘德伍　彭燕　李津　章志伟　宁璞　刘移峰

　　目的:探讨miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的可能性及机制。

　　方法:取包皮环切术获得的人正常包皮组织5例，采用0.25%胰蛋白酶-EDTA联合消化法分离表皮和真皮，应用Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化人表皮干细胞，倒置相差显微镜下观察细胞生长状况，行β1整合素（integrin β1，ITGB1）、角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）、CK1、CK10、CK18、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）免疫细胞化学染色鉴定。通过脂质体转染将 miRNA-203模拟物导入人表皮干细胞（实验组），转染对照miRNA模拟物作为对照组。免疫细胞化学染色法对转染后细胞行ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA单克隆抗体检测鉴定；实时荧光定量RT-PCR检测转染前及转染后72 h的细胞中miRNA-203、P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA mRNA相对表达量；Western blot法检测P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA蛋白相对表达量；并对miRNA-203的mRNA表达与P63的mRNA和蛋白表达分别行Pearson相关分析。

　　结果:转染前人表皮干细胞CK19、ITGB1阳性表达，转染后CK1、CK10、CK18、CEA阳性表达。实验组转染后细胞miRNA-203 mRNA相对表达量显著高于转染前（P<0.05）。实验组转染后细胞CK1、CK10、CK18、CEA mRNA及蛋白的相对表达量均高于转染前及对照组，而P63、CK19、ITGB1 mRNA及蛋白的相对表达量均低于转染前和对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。上述指标对照组与转染前比较差异均无统计学意义（P>0.05）。转染前后miRNA-203的mRNA表达量与P63的mRNA和蛋白相对表达量均成负相关，转染前相关系数分别为—0.91（t=3.862，P=0.042）及—0.96（t=5.971，P=0.009）；转染后相关系数分别为—0.92（t=4.283，P=0.031）及—0.95（t=5.842，P=0.011）。

　　结论:miRNA-203能诱导人表皮干细胞分化为汗腺细胞，其作用可能是通过靶向抑制P63来实现的。