王玺 王胜 肖玉周
目的:评价将人脐血间充质干细胞（human umbilical cord blood mesenchymal stem cells，hUCBMSCs）来源的类雪旺细胞（Schwann cells，SCs）作为种子细胞，修复大鼠坐骨神经15 mm缺损的效果，为hUCBMSCs应用于临床治疗周围神经缺损提供实验依据。
方法:SPF级3月龄雄性SD大鼠45只，体重200～250 g。取新生儿脐带血，淋巴细胞分离液复合高分子量羟乙基淀粉分离培养hUCBMSCs并鉴定；取第3代hUCBMSCs，采用改良化学诱导法联合细胞因子方法诱导分化培养类SCs并鉴定。取15只SD大鼠坐骨神经，采用液氮反复冻融振荡洗涤法制备去细胞神经基膜管作为支架材料；将密度1×107个/mL的类SCs细胞悬液多点注射至该支架内复合培养7 d构建组织工程神经。取SD大鼠30只制备长约15 mm坐骨神经缺损动物模型，根据缺损神经修复方法不同，实验分为A、B、C 3组（n=10），A组采用组织工程神经缝合，B组采用未复合类SCs的去细胞神经基膜管缝合，C组采用自体坐骨神经原位缝合。术后行大体观察、坐骨神经功能指数（sciatic function index，SFI）测定、神经电生理功能检测、腓肠肌湿重测定、Masson染色评价神经修复情况。
结果:分离培养的hUCBMSCs高表达MSCs表面标志；诱导培养后类SCs经免疫细胞化学染色检测示神经胶质细胞标志物S100b、胶质纤维酸性蛋白、P75表达呈阳性。术后8周，大体观察示A组组织工程神经管壁无坏死及液化，周围轻度粘连，吻合处连续性较好；B组支架外观与A组相似；C组自体神经周围粘连较A、B组轻，吻合口光滑，无明显膨大，颜色与正常神经相似。各组大鼠术后SFI随时间延长呈逐渐降低趋势，C组SFI 恢复优于A、B组，A组优于B组（P<0.05）。术后各组大鼠远端吻合口处均可检测到神经复合动作电位，波幅及传导速度C组均优于A、B组，A组优于B组（P<0.05）。术后各组大鼠实验侧小腿腓肠肌与健侧相比，均发生不同程度萎缩；腓肠肌湿重恢复率C组优于A、B组，A组优于B组（P<0.05）。Masson染色示A组可见大量再生神经纤维，有髓神经纤维排列较为整齐、致密，纤维直径相似；C组有髓神经纤维密度、直径及髓鞘厚度和轴突直径均明显多于A、B组，A组多于B组（P<0.05）。
结论:hUCBMSCs来源的类SCs能够促进大鼠15 mm坐骨神经损伤修复可作为组织工程神经种子细胞来源。
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