綦惠 永生 陈磊 江建 高新生 孙磊
目的:制备脱细胞真皮基质，检测其细胞及组织相容性，探讨其作为软骨组织工程支架材料的可行性。
方法:取新生小牛背部真皮组织，以0.5%SDS溶液水平振荡脱细胞，0.5%胰蛋白酶行胶原纤维结构重塑，甲醛浸泡进行交联，0.5%硫酸软骨素溶液中超声振荡进行表面修饰，制备脱细胞真皮基质支架材料。乙醇排除法检测结构重塑前后材料孔隙率变化；MTT法检测材料细胞毒性；将材料植入成年SD大鼠背部皮下，评价组织相容性。采用以3∶7比例共培养的第2代新西兰大白兔软骨细胞与骨髓基质细胞作为种子细胞，种植于脱细胞真皮基质支架材料（实验组），48 h后扫描电镜观察细胞黏附情况；RT-PCR和Western blot检测接种于支架的种子细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达，并与单纯培养的种子细胞（对照组）进行比较。
结果:经0.5%胰蛋白酶溶液结构重塑后的脱细胞真皮基质支架材料表面光滑、孔隙均匀；孔隙率达85.4% ± 2.8%，显著高于重塑前的支架（72.8% ± 5.8%）（t= —4.384，P=0.005）；细胞毒性检测为1 级，合格；埋植于大鼠背部皮下后，随时间延长，组织炎性细胞数呈减少趋势（P < 0.05）。种子细胞接种后，扫描电镜示大量细胞贴附于支架上，细胞形态饱满，可见表面微绒毛和分泌现象。RT-PCR与Western blot检测结果示，实验组和对照组Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达量比较，差异均无统计学意义（t=1.265，P=0.235；t=0.935，P=0.372）。
结论:经脱细胞-结构重塑-交联-表面修饰制备的脱细胞真皮基质结构良好，种子细胞能大量黏附于支架材料上，细胞Ⅱ型胶原表达水平无明显改变，有望作为软骨组织工程支架材料。
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