烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响

庄淑波  柴家科  郁永辉  段红杰  刘玲英  樊军  侯玉森  王一贺

　　目的:通过观察大鼠烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响，探索烧伤对脂肪代谢的影响。

　　方法:选择成年雄性SD大鼠 48 只，随机分为假伤组及烧伤1、4、7、14、21 d组，每组 8只。各烧伤组大鼠背部制备30% 总体表面积的Ⅲ度烫伤模型，分别于对应时间点收集血清；假伤组不作处理，取血清作为正常对照。采用各组血清培养3T3-Ll前脂肪细胞，MTT法检测细胞增殖活性，选择增殖能力最低组血清作为后续刺激血清。取3T3-Ll前脂肪细胞分别采用假伤血清（A组）、烧伤血清（B组）、假伤血清成脂诱导（C组）、烧伤血清成脂诱导（D组）培养。倒置显微镜下观察细胞生长情况，诱导培养7 d后行油红O染色，进行脂肪细胞计数并测量吸光度（A）值，实时定量PCR及Western blot检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（preoxisome proliferator-activated receptor γ，PPAR-γ）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）基因及蛋白表达。

　　结果:MTT检测示，与其余各组比较，烧伤4、7 d组细胞增殖能力显著降低（P < 0.05），其中7 d组最低（P < 0.05），取烧伤7 d组大鼠血清作为后续刺激血清。倒置显微镜观察示，培养后A、B组细胞形态无明显变化；诱导培养后C、D组细胞呈脂肪细胞样变，其中C组最显著。油红O染色示，C组细胞染色呈阳性，D组为弱阳性，余均为阴性；脂肪细胞计数以及A值比较示，A组高于B组、C组高于D组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。实时定量PCR及Western blot检测示，B组PPAR-γ基因相对表达量明显低于A组（P < 0.05），但LPL基因相对表达量差异无统计学意义（P > 0.05）；PPAR-γ、LPL蛋白表达量比较差异无统计学意义（P > 0.05）。D组PPAR-γ、LPL基因及蛋白表达量均显著优于C组（P < 0.05）。

　　结论:大鼠烧伤7 d 血清可致3T3-Ll前脂肪细胞成脂分化能力下降。