钛颗粒对成骨细胞增殖分化及细胞形态的影响

林绵辉　史玉朋　王磊　叶俊强

　　目的:通过观察钛颗粒对成骨细胞增殖分化和细胞形态的影响，探讨其可能的内在联系和作用机制。

　　方法:取10只新生24 h SD大鼠颅骨，采用多次酶消化法体外分离培养成骨细胞，ALP和茜素红染色进行细胞鉴定。取生长良好的第3代细胞，分别采用浓度为0.01、0.05、0.1、0.5、1 mg/ mL的钛颗粒培养基（0.01、0.05、0.1、0.5、1 mg/ mL组）培养，7 d后用细胞计数试剂盒8检测吸光度（A）值，比较不同浓度钛颗粒对成骨细胞增殖能力的影响，并筛选半数致死浓度；ELISA法检测细胞Ⅰ型胶原表达，比较不同浓度钛颗粒对成骨细胞分化能力的影响。另取以半数致死浓度钛颗粒培养7 d的成骨细胞（实验组）进行FITC-鬼笔环肽和碘化丙啶双重荧光染色，激光共聚焦显微镜下观察吞噬钛颗粒后细胞形态学的改变。以上观察指标均以正常第3代成骨细胞作为对照组。

　　结果:ALP及茜素红染色鉴定提示培养的细胞为成骨细胞。培养7 d，各浓度组成骨细胞增殖、分化能力与对照组比较均有不同程度下降，差异均有统计学意义（P < 0.05）。同时随浓度增加，各浓度组对成骨细胞增殖的抑制作用逐渐增强，成骨细胞Ⅰ型胶原表达逐渐降低；除0.01、0.05 mg/mL组间差异无统计学意义（P > 0.05）外，其余各浓度组间比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。钛颗粒的半数致死浓度为0.5 mg/mL。激光共聚焦显微镜下示，与对照组比较，实验组吞噬了钛颗粒的成骨细胞皱缩变形，伪足收缩变短，微丝排列紊乱。

　　结论:钛颗粒可抑制成骨细胞的增殖和分化能力，这种作用可能与吞噬钛颗粒后细胞形态学的改变有关。