整合素β8在共培养系统中对缺氧缺血后神经元凋亡的影响

李晋辉   陈大鹏   唐军   伍金林   屈艺   母得志

    目的:探讨星形胶质细胞与神经元共培养系统中，缺氧缺血后星形胶质细胞表达的整合素β8对神经元凋亡的影响。

    方法:取新生1～3 d SD大鼠及孕16 d SD大鼠的胎鼠脑皮质，分别分离培养星形胶质细胞及神经元，免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。取缺氧缺血培养复氧后12 h、1 d、2 d星形胶质细胞（实验组）以及正常星形胶质细胞（对照组），RT-PCR检测细胞整合素β8表达变化。利用整合素β8小干扰RNA （small interfering RNA，siRNA）感染抑制星形胶质细胞整合素β8表达，实时荧光定量PCR检测其抑制效率。取正常神经元及星形胶质细胞共培养（共培养缺氧缺血组）、经整合素β8 siRNA感染后2 d的星形胶质细胞与正常神经元共培养（β8 RNA干扰组）以及正常神经元（单纯缺氧缺血组），行体外模拟缺氧缺血处理；复氧后1 d收集细胞，TUNEL染色法检测整合素β8对神经元凋亡的影响；以正常神经元作为对照组。

    结果:免疫细胞化学染色鉴定示，星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白及神经元神经核阳性率均达90%以上。与对照组相比，实验组星形胶质细胞中整合素β8 mRNA表达在复氧后12 h即增加，1 d时达峰值，2 d时仍维持较高水平；各时间点实验组与对照组比较及实验组复氧后各时间点间比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）；整合素β8 siRNA感染后，实验组整合素β8 mRNA表达明显降低，感染后2 d降至最低值（P < 0.05）。TUNEL检测示，与对照组相比，单纯缺氧缺血组、共培养缺氧缺血组及β8 RNA干扰组神经元凋亡明显增多（P < 0.05）；共培养缺氧缺血组及β8 RNA干扰组细胞凋亡指数较单纯缺氧缺血组明显降低，共培养缺氧缺血组低于β8 RNA干扰组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。

    结论:缺氧缺血后，星形胶质细胞中整合素β8表达增高，神经元凋亡率下降，对受损神经元具有明显保护作用。