华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响及作用机制研究

曹飞      康小红      王立芳

     目的:通过观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响，探讨其诱导细胞凋亡的可能机制。

     方法:以人骨肉瘤细胞株U-2OS作为实验细胞，MTT法检测采用10、20、50、100、200、400 nmol/L华蟾酥毒基培养24、48、72 h后细胞增殖情况，以单纯U-2OS细胞作为对照组；流式细胞仪检测分别采用100 nmol/L华蟾酥毒基（实验组）及100 nmol/L华蟾酥毒基联合泛半胱氨酸蛋白酶（Caspase）抑制剂Z-VAD-FMK（对照组）培养48 h后细胞凋亡情况，以单纯U-2OS细胞作为空白对照组；用Caspase-3活性检测试剂盒检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞Caspase-3活性的影响，以单纯U-2OS细胞作为对照组；Western blot法检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞凋亡通路相关蛋白（cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bcl-2、Bax）表达的影响，以单纯U-2OS细胞作为对照组。

     结果:MTT法检测示，同一时间点细胞存活率随华蟾酥毒基浓度增加而显著降低，同一浓度组细胞存活率随时间延长亦显著下降，比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。流式细胞仪检测显示，实验组细胞凋亡率为46.87% ± 11.23%，显著高于对照组的2.34% ± 0.98%及空白对照组的1.04% ± 0.25%（P < 0.05）。20、50、100 nmol/L组Caspase-3活性分别为1.14 ± 0.32、1.31 ± 0.41、1.92 ± 0.54，与对照组比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）；100 nmol/L组与20、50 nmol/L组比较，差异亦有统计学意义（P < 0.05）。Western blot检测结果显示，与对照组相比，各浓度组促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax均显著上调，抗凋亡蛋白Bcl-2下调，Bax/Bcl-2提高，差异均有统计学意义（P < 0.05）；各浓度组随浓度增加也呈相同变化趋势，比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。

     结论:华蟾酥毒基可抑制人骨肉瘤细胞U-2OS的增殖，促使细胞凋亡；其作用机制可能与线粒体介导的凋亡途径有关。