共培养的大块组织工程肝构建及体内植入研究

曲晓丽   王敏   贺健康   刘亚雄   周新民   李涤尘   靳忠民

    目的:选择大鼠成纤维细胞和原代肝细胞共培养于胶原水凝胶支架中，进行多细胞的大块组织工程肝构建及体内植入研究，以期构建长期存活的功能性肝组织。

    方法:采用3-D打印技术制备硅胶模具，经成胶脱模制备胶原水凝胶支架。将大鼠肺成纤维细胞与原代肝细胞以0.4∶1比例种植于该支架中（B组），以种植同密度单纯原代肝细胞为对照（A组）。体外培养1、3、7、14、21 d，观察细胞形态并检测肝功能（白蛋白和尿素分泌量）。取24只SD大鼠，采用皮下注射四氯化碳方法制备肝硬化模型，将A、B组组织工程肝分别植入大鼠腹腔大网膜内（n=12），植入后3、7、14、21、28 d行HE、细胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）及ALB染色观察。

    结果:体外实验中，与A组相比，B组肝细胞呈多边形，细胞核大且圆，肝功能表达旺盛，并且在7 d时聚团生长最多，7 d后白蛋白及尿素分泌量显著增高（P < 0.05）。体内实验中，B组肝细胞能存活至28 d，白蛋白和尿素分泌也显著增多，细胞团聚成条索形，形成了类正常肝脏组织。

    结论:多细胞大块组织工程肝体内植入时形成了类正常肝脏组织，并长期存活，为构建结构和功能更完整的组织工程肝奠定了基础。